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基因擴增實(shí)驗室(PCR實(shí)驗室)
PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗的常規方法,并沒(méi)有嚴格的凈化要求,但是為了避免各個(gè)試驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排是氣流組織形式。同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。
試劑貯存和準備區
該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經(jīng)過(guò)其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。對氣流壓力的控制,本區并沒(méi)有嚴格的要求。
標本制備區
該區域主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為相對于臨近區域為正壓,以避免從鄰近區域進(jìn)入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì )發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區域內不必要的走動(dòng)。
擴增反應混合物配制和擴增區
擴增反應混合物配制和擴增區:該區域主要進(jìn)行的操作為NDA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可以在本區域內進(jìn)行。在巢氏PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開(kāi)反應管。因此巢氏擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區域內進(jìn)行。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區域漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。
擴增產(chǎn)物分析區
該區域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于臨近區域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區域擴散至其它區域。
完備的實(shí)驗室配套設施
完備的實(shí)驗室配套設施是保證實(shí)驗工作的必要條件,應根據各個(gè)實(shí)驗室實(shí)驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。
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